Testiste, ePABP [embriyonik poli (A) bağlanma proteini] ve PABPC1 [Poli(A) bağlanma proteini, sitoplazmik 1] genlerinin ekspresyon düzeyleri ve hücresel dağılımlarının belirlenmesi

Abstract

ePABP [embriyonik poli(A) bağlanma proteini], oosit gelişim döneminde depolanan maternal mRNA?ların translasyonel düzenlenmesinde görev alır. Embriyonik genom aktivasyonundan sonraki erken dönem embriyolarda ve somatik hücrelerde, mRNA?ların translasyonel kontrolleri ise PABPC1 [poli(A) bağlanma proteini, sitoplazmik 1] tarafından gerçekleştirilir. Memelilerde, spermatogenezin spermiyogenez aşamasının ortasında transkripsiyon durmaktadır. Bu çalışmada, depo mRNA?ların translasyonel kontrollerinde görev alan ePABP ve PABPC1 mRNA?larının postnatal fare testislerinde ve izole edilen spermatogenik hücrelerdeki ekspresyon düzeyleri ile hücresel yerleşimlerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Bu amaçla, postnatal hayatın farklı yaşlarında olan (6., 8., 16., 20., 29., 32. ve 88. gün) C57BL/6 ırkı erkek farelerden testisler alındı. Alınan testisler ve bu testislerden izole edilen spermatogenik hücrelerde ePABP ve PABPC1 gen ekspresyonları qRT-PCR ile belirlendi. Ayrıca, postnatal fare testislerinde RNA in situ hibridizasyon yöntemi ile ePABP mRNA?sının hücresel yerleşimi de ortaya konuldu. Çalışma sonucunda, ePABP gen ekspresyonu 6., 8., 16. ve 20. gün fare testislerinde çok düşük düzeyde olduğu gözlenirken; 29. günde yükselmeye başlamış ve 32. günde en yüksek düzeye ulaşmıştır. PABPC1 ekspresyonu ise 6. ve 8. gün testislerde düşük miktarda bulunurken; 16. günden itibaren yükselmeye başladığı ve 32. günde en yüksek düzeye ulaştığı gözlendi. ePABP gen ekspresyonu, 32. gün testisten elde edilen spermatogonya, spermatosit ve yuvarlak spermatidlerde diğer günlere göre daha yüksek olduğu belirlendi. ePABP sonuçlarına benzer olarak, PABPC1 ekspresyonu da 32. gün testisten elde edilen spermatogonya, spermatosit ve yuvarlak spermatidlerde diğer günlere göre daha yüksek düzeyde olduğu görüldü. Postnatal fare testislerine uygulanan RNA in situ hibridizasyon (RNA ISH) sonucunda ise ePABP mRNA?sının sadece seminifer tübüllerdeki spermatogenik hücrelerde sitoplazmik yerleşimli olarak belirlendi. Ayrıca, ePABP mRNA?sının 29., 32. ve 88. gün testislerin spermatogonyalarda diğer spermatogenik hücrelere göre daha yüksek düzeyde olduğu ortaya konuldu. Bu bulgular, ePABP ve PABPC1 genlerinin fare spermatogenez sürecinde üretilen mRNA?ların translasyonel kontrollerinde görev alabileceğini göstermektedir.