Farklı büyüme faktörü kombinasyonlarının sertoli hücrelerinin üç boyutlu tübül oluşturma kapasitelerine etkisinin araştırılması

Abstract

Amaç: Sertoli hücrelerinin in vitro testiküler organizasyon süreci iki aşamadan oluşur: testis kordonu benzeri yapıların ve tübül benzeri yapıların oluşması. Embriyonik dönemde seminifer tübüllerin oluşumunda direkt rol oynayan faktörlerden hepatosit büyüme faktörü (HGF), postnatal dönemde de Sertoli hücrelerinden salgılanır. Gliyal hücre kökenli nörotrofik faktör (GDNF) spermatogonyal kök hücre devamlılığını sağlar. Renal tübülogenez sürecinde; GDNF'nin HGF'nin in vitro tübül oluşturma kapasitesini arttırdığı ortaya konmuştur. Testis tübüllerinin oluşumunda HGF'nin rolü olduğu bilinmesine rağmen, renal tübülogeneze benzer olarak, GDNF'nin de bu süreçte görev alıp almadığı hakkında literatürde henüz bir bilgi yoktur. Bu çalışmada; GDNF'nin, HGF'ye ek olarak, Sertoli hücrelerinin üç boyutlu (3B) tübül oluşturma kapasitelerine etkisinin araştırılması amaçlanmıştır. Yöntem: 15P-1 Sertoli hücre hattı kullanılarak; kontrol, sadece HGF varlığında, sadece GDNF varlığında ve HGF ile GDNF varlığında olacak şekilde 4 grup oluşturulmuştur. Beş gün boyunca Matrigel™' içerisinde 3B kültüre edilen Sertoli hücrelerinin tübül oluşturma kapasiteleri invert mikroskop altında ve parafin kesitlerde hematoksilen-eozin boyaması ile değerlendirilmiştir. Sertoli hücrelerinin kimliğinin değişmediğini göstermek için kit ligand (Sertoli belirteci; pozitif kontrol) ve c-kit (Germ hücre belirteci; negatif kontrol); polarizasyonunu göstermek için ise sıkı bağlantı proteini zonula okludens-1 (ZO-1) protein ifadeleri immünofloresan yöntemi ile değerlendirilmiştir. Bulgular: HGF ile birlikte GDNF uygulaması Sertoli hücrelerinin 3B kültürü sırasında in vitro organizasyonunu, lümen benzeri yapıların oluşumunu ve Sertoli hücrelerinin polaritesini anlamlı olarak arttırmıştır. Sonuç: HGF ile uyarılmış Sertoli hücrelerinin 3B tübül oluşturma kapasitesini GDNF eklenmesi daha da arttırır.