Farelerde ovaryum kriyoprezervasyonu ve transplantasyonu sonrasında meydana gelen folikül kaybında anti-müllerian hormon uygulamasının koruyucu rolü

Abstract

Amaç: ODKT sonrasında oluşan en önemli sorunlardan biri PF havuzunun büyük oranda hızla tükenmesidir. Büyüyen foliküllerden salgılanan Amh'un rekombinant formunun uygulanmasının kanser kemoterapisi sebebiyle kaybedilen PF havuzunu koruduğu yeni bir bilgidir. ODKT sonrasında PF'lerin büyük oranda kaybına yol açan süreçte Amh'nin rolü̈ tam olarak bilinmemektedir. Bu çalışmanın hipotezi; "ODKT sonrasında Amh uygulanmasının PF havuzunu koruduğudur". Bu hipotezi test etmek için ODKT sonrasında rAmh uygulamasının PF havuzunu koruyup korumadığını ve bu sürecin mekanizmasını araştırılmıştır. Yöntem: Farelerde; kontrol, ULO-T, BLO-T ve BLO-T+AMH grupları oluşturulmuştur. Transplantasyondan sonraki ikinci haftanın sonunda ovaryum greftleri parafin doku takibine alınmıştır. Öncelikle, tüm gruplardan elde edilen OD seri kesitlerinde, normal ve atretik primordiyal ve büyüyen foliküllerin sayısı değerlendirilmiştir. Ardından, PF'lerin büyümesinde görevli olan KitL, Bmp15, Gdf9, p-s6K, Tsc1 ve p27 protein ifadeleri immünohistokimya yöntemiyle, büyüyen foliküllerin proliferasyonu PCNA immünohistokimyası ile ve hücre ölümü ise TUNEL yöntemiyle değerlendirilmiştir. Son olarak, tüm gruplarda Amh düzeyleri ELISA yöntemiyle değerlendirilmiştir. Bulgular: ULO-T ve BLO-T gruplarında PF rezervi kontrol grubuna göre anlamlı olarak azalmıştır ve BLO-T+AMH grubundaki PF'lerin sayısı anlamlı olarak yüksektir. KitL, Bmp15, p-s6k ve p27 ifadeleri, ULO-T, BLO-T ve BLO-T+AMH gruplarında kontrole göre anlamlı olarak azalmıştır. ULO-T ve BLO-T gruplarında kontrol grubuna göre anlamlı olarak azalan Tsc1 ifadesi ve anlamlı olarak artan Gdf9 ifadesi, BLO-T+AMH grubunda kontrole benzerdir. Gruplar arasında büyüyen foliküllerdeki proliferasyon ve hücre ölümü benzer bulunmuştur. Kontrol grubuna kıyasla, BLO-T grubunda transplantasyonunun 9. gününden itibaren azalan plazma Amh düzeyi, BLO-T+AMH grubunda 28. güne kadar kontrol grubu ile benzer düzeyde kalmıştır. Sonuç: Bu çalışma, ovaryumların unilateral ya da bilateral olarak çıkarılarak kriyoprezervasyonu re-transplantasyonunun sonrasında Amh seviyesinin azalmasıyla birlikte, PF havuzunun anlamlı ölçüde azaldığını ortaya koymuştur. Diğer yandan, ovaryumların bilateral çıkarılmasının ardından kriyoprezervasyonu ve re-transplantasyonu sonrasında 28 gün rAmh uygulaması PF rezervini Tsc1 ve Gdf9 ekspresyonunu düzenleyerek korumuştur. Bu çalışma ile, ODKT sonrası ekzojen rAmh uygulamasının PF kaybını önemli düzeyde önleyebileceğini mekanistik olarak açıklamış ve yeni araştırmalar için önemli temel bilgi sağlamıştır.